MiniBlot™蛋白转膜转移芯

使用说明：
1. 转膜准备
1) 将蓝冰冰盒放入-20℃冰箱至少1小时以上备用；使用后再放回冰箱中冷冻储存备用。
注：蓝冰冰盒可直接-20℃冰箱预冷冻，请勿打开，无须注水，可循环使用。
2) 配制转膜液：蛋白转膜时的溶液推荐使用碧云天的Western转膜液(P0021A/P0021B)，或自行配制转膜液。
注：提前配制转膜液，并冷却至4℃会有利于降低转膜时温度。
3) 按照凝胶大小剪切转印滤纸和印迹膜，注意在操作膜时一定要戴手套以避免污染。在转膜液中平衡凝胶，并浸泡印迹膜、转印滤纸和转移衬垫(1-5分钟)。
推荐在Western实验中选用PVDF膜(FFP24/FFP26/FFP28/FFP32/FFP33/FFP36/FFP39)。PVDF膜在使用前须经浸润和活化，推荐使用碧云天生产的安全无毒的PVDF膜浸润活化液(P0021S)。也可以使用硝酸纤维素膜(NC膜) (FFN02/FFN03/FFN05/FFN06/FFN08)，但硝酸纤维素膜比较脆，在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。印迹膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。转膜时推荐使用碧云天生产的高品质预裁剪转印滤纸(7.5×10cm)(FFP51)。
4) 准备转移三明治(图2)：
a. 将转移三明治夹的黑色面向下，放置在干净的桌面上。
注：在转膜液中操作转移三明治，对气泡的排除有一定的帮助。
b. 在转移衬垫上放置浸泡过的转印滤纸。
c. 把凝胶放在转印滤纸上，注意排出凝胶与转印滤纸之间的气泡。
d. 将用转膜液充分浸泡并完全湿润的印迹膜放在凝胶上，注意排出印迹膜与凝胶之间的气泡。
注意：如果转移是在酸性条件下进行，请交换凝胶与膜的位置，将膜放在凝胶的负极(即三明治夹套黑色)一端。在酸性条件下，蛋白质向负电极方向转移。不要反转电极本身，否则将损坏电泳槽。
e. 将转印滤纸放置在印迹膜上并排出所有气泡，然后加上转移衬垫。
注意：将气泡完全排出是获得良好转移效果的关键，否则将严重影响最后的结果。每一步操作可使用赶气泡滚子(E6071)轻轻滚动将气泡赶出。

图2. 转移三明治的准备。

5) 上下适当用力夹紧转移三明治夹，用白色滑块锁住夹套，注意不要移动夹套中的三明治。
6) 转移三明治夹的黑色面对着转移电泳芯组件的黑色面，将转移三明治夹套插入转移电泳芯组件中(图3)，如果有两块凝胶，重复上述步骤制备另一个转移三明治夹。
7) 转移电泳芯组件的放置：
先把电泳槽放置于平整桌面上，使正面(具有“2 Gels”和“4 Gels”标记的那一面)朝向操作者；将转移电泳芯组件红色面朝向操作者，放入电泳槽远离操作者位置(即电泳槽突起卡槽位置)，转移电泳芯组件边缘的红色标记为正极，黑色标记为负极，请对应于电泳槽上标记的正极(+)和负极(-)。如果方向正确，转移电泳芯组件的红色标记应该在右边，黑色标记在左边，同时电极和电泳槽突起卡槽在一条直线上(图4)。注意，由于特殊设计，位置和方向的错误会使电泳槽上盖无法盖合。
8) 在电泳槽中放入预先-20℃冷冻的蓝冰冰盒，并加满转膜液，盖上电泳槽上盖。在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把整个电泳槽放置在冰浴中进行转膜。
9) 将电源线缆插入电泳电源，打开电泳电源开始电泳。通常设定转膜电流为300-400mA，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。
10) 电泳结束后，打开三明治夹，将膜取出继续下一步操作。转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液(P0022)对膜进行染色，以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液(P0017)对完成转膜的凝胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。

图3. 转移三明治夹套插入转移电泳芯组件中。

图4. 转移电泳芯组件放入电泳槽中。注：实际操作中，转移三明治夹套可先插入转移电泳芯组件中。

日常维护：
本系统的电泳槽、转移电极芯组件、转移三明治夹、转移衬垫等，使用后用自来水彻底冲洗干净，并使用蒸馏水或去离子水适当润洗。转移电极芯组件勿用刷子洗刷铂金丝，否则容易造成铂金丝磨损，影响其使用寿命。如果铂金丝上有白色物质残留，浸泡在去离子水即可去除。
转移三明治夹和转移衬垫属于消耗品，有一定的使用寿命，如果有破损，须及时更换。

故障排除：

质量保证：
本产品为用户提供为期一年的质量保证。凡由产品的原料及制作工艺造成的产品缺陷，在产品的质量保证期内碧云天均负责免费维修或更换。如有下列情况发生，则产品不在质量保证范围之内：
1) 由不正确的操作引起的损坏。
2) 由非碧云天指定维修人员的维修改造引起的损坏。
3) 由于不可抗因素造成的损坏。
4) 一般性易损部件，如铂金丝、转移三明治夹、转移衬垫、蓝冰冰盒等。
5) 使用有机溶剂造成的腐蚀性损坏。

附录：本产品各部件材料

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